5分鐘前 pcr實驗室服務為先「英瀚斯」[英瀚斯2eefa30]內容：ELISA 是一種結合抗原、抗ti特異性反應和酶對底物高xiao催化作用的高敏感性免yi學實驗技術。ELISA 的基礎是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶標記。結合在固相載體表面的抗原或抗ti仍保持其免yi學活性，酶標記的抗原或抗ti既保留其免yi學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復合物與液體中的其他物質分開，再加入酶標記的抗原或抗ti，通過反應使其結合在固相載體上。此時固相上的酶含量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。加入酶反應的底物，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。往每個EP管中加入250ul，劇烈震蕩30s，冰上靜置12min[問l。

Southern雜交

實驗原理

Southern印跡雜交（Southern blot）是1975年由英國人southern創建，是研究DNA圖譜的基本技術。Southern印跡雜交是進行基因組DNA特定序列定位的通用方法。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經限制性內切酶消化的DNAl片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNAl片段轉移至尼龍膜或其他固相支持物上，經干烤或者紫外線照射固定，再與相對應結構的標記探針進行雜交，用放l射自顯影或酶反應顯色，從而檢測特定DNA分子的含量。miRNA在物種進化中相當保守，在動物、植物和真菌等中發現的miRNA表達均有嚴格的組織特異性和時序性。

染色質免l疫共沉淀技術(ChIP)

基于體內分析而發展的染色質免l疫沉淀分析Chr omat in immunopcipitat ionassay kit, ChIP)技術可以真實、完整地反映結合在DNA序列上的調控蛋白。由于ChIP采用甲醛固定活l細胞或者組織的方法，因此能比較真實的反映細胞內TF與Promoter的結合情況，還可以用來研究組蛋白的各種共價修飾與基因表達的關系。近年來,這種技術得到不斷的發展和完善。采用結合微陣列技術在染色體基因表達調控區域檢查染色體活性,是深入分析癌l癥、心血l管病以及中央神經系統紊亂等疾病主要通路的一-種非常有效的工具。源井生物提供的腺相關病毒顆粒經過超su離心純化,并通過qPCR對病毒基因拷貝進行滴定。

染色質免l疫沉淀分析(ChIP) 的基本原理是在活l細胞狀態下，當用甲醛處理時，相互靠近的蛋白與蛋白、蛋白與核酸(DNA或RNA)之間會產生共價鍵。細胞內，當F與Promoter相互結合時，它們必然靠的比較近或者契合在一起，這個時候用甲醛處理，能使它們之間產生共價鍵。固定的蛋白質DNA復合物通過超聲或酶處理將其隨機切斷為-定長度范圍內的染色質小片段然后通過抗原抗l體的特異性識別反應沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的DNAl片段，通過對目的片斷的純化與檢測，從而獲得蛋白質與DNA相互作用的信息。通過qPCR或二代測序，篩選與目的蛋白互作的未知DNA信息。除了文中提到了三個主流平臺，外顯子組捕獲方面的新產品也在不斷推出，研究人員的選擇也將更廣泛。

2.引物純化方式有哪些，如何選擇？

◆　脫鹽

寡核苷酸合成后，為了純化寡核苷酸成為天然的DNA結構，首先必須去除保護基團。通過濃氨水處理，合成的寡核苷酸從固相載體上分離，2-乙氧基--磷酸二脂鍵的保護基團，以及堿基的保護基團基（苯甲酰基和異丁基）被去除，從而形成了天然的DNA結構。然而，必要的去保護步驟完成后，寡核苷酸混合物還包含幾種必須被去除的小分子有機化合物。所有非必須有機化合物被移除的過程通常叫做脫鹽。脫鹽純化可以借助反向硅膠柱進行。盡管脫鹽純化可以移除所有的非必須有機雜質，但它不能有效移除合成中產生微量的提前終止的寡核苷酸雜鏈。然而，脫鹽的寡核苷酸還是能夠滿足ＰＣＲ檢測等基礎生物研究。在測定時，受檢標本(測定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復合物與液體中的其他物質分開，再加入酶標記的抗原或抗ti，通過反應使其結合在固相載體上。

◆　BioRP / OPC純化

如果寡核苷酸以“三苯”的形式合成，則N-寡核苷酸包含5’-DMT基團，提前終止的寡核苷酸不包含該基團。因為DMT基有強的親脂的特性，有5’-DMT基團的寡核苷酸與反相樹脂有親和性，因此反相親和樹脂通常被用于寡核苷酸的純化。利用反向樹脂和5’－DMT寡核苷酸存在強親和力，但是提前終止的寡核苷酸不包含DMT基團，所以，我們能夠成功的把想要的N-寡核苷酸從提前終止的寡核苷酸雜質中分離出來。分子生物學檢測服務隨著生命科學和化學的不斷發展，人們對生物體的認知已經逐漸深入到微觀水平。